Генетическое - бонус-трек
May. 2nd, 2009 03:12 am![[personal profile]](https://www.dreamwidth.org/img/silk/identity/user.png){kind=small}
city_ratИ еще немного о биотехнологиях. Рецепт.
1. вскипятить 3 литра воды;
2. добавить 500g сахара, растворить;
3. добавить 20g агара, избегая образования комков;
4. добавить 375g манки, снова избегая образования комков;
5. добавить 200g пекарских дрожжей, разведённых в 800ml воды;
6. довести до кипения;
7. остудить до 60-70оС и разлить по используемым ёмкостям.
Альтернативная процедура из Института Биофизики Клетки (Пущино)
1. целесообразнее при приготовлении в первую очередь добавлять в кипящую воду дрожжи и варить около 1.5 - 2 часов до прекращения образования пены;
2. затем - агар, и варить 15 минут;
3. потом - сахар (можно варенье или сахар + варенье в одинаковых количествах), варить 20 мин.;
4. наконец добавить манку в указанных количествах, варить до разваривания крупы (30мин - 1час);
5. остудить до 60oС и добавить пропионовой кислоты для предотвращения развития плесени;
6. разлить по используемым ёмкостям, накрыть марлей и оставить до испарения воды;
7. ёмкости плотно закрыть стерильными ватными пробками.
А получится превосходный корм для мух-дрозофил: рабочей лошадки генетических исследований.
На закуску:
Фенольный метод выделения DNA из мух
1. взвесить мух;
2. в керамической ступке заморозить мух в жидком азоте, растереть в тонкий порошок;
3. долить в ступку жидкий азот, добавить DB из расчета 1.2ml на 100mg, растереть;
4. перенести замороженный порошок в пробирку;
5. 56oС, > 3h;
6. мягко экстрагировать равным объёмом фенола;
7. ЦФ в два этапа:
(1) 1.5krpm, NT, 5',
(2) 4.5krpm, NT, 10';
8. мягко экстрагировать Ф:Х, Х, (ЦФ 4.5krpm, NT, 10');
Осаждение EtOH.
9. добавить:
AcNH4 10M 1/4V,
EtOH (96%) 2V;
10. комочек DNA прополоскать, перенеся типом в 70% EtOH;
11. подсушить (не пересушить!), растворить в TE или H2O (из расчёта ~1µl/муху).
Диализ.
12. поместить DNA в диализный мешок;
13. диализ: ~сутки против нескольких смен TE.
А вы говорите - "подготовьте мышь к опыту...". Да, именно так!
1. вскипятить 3 литра воды;
2. добавить 500g сахара, растворить;
3. добавить 20g агара, избегая образования комков;
4. добавить 375g манки, снова избегая образования комков;
5. добавить 200g пекарских дрожжей, разведённых в 800ml воды;
6. довести до кипения;
7. остудить до 60-70оС и разлить по используемым ёмкостям.
Альтернативная процедура из Института Биофизики Клетки (Пущино)
1. целесообразнее при приготовлении в первую очередь добавлять в кипящую воду дрожжи и варить около 1.5 - 2 часов до прекращения образования пены;
2. затем - агар, и варить 15 минут;
3. потом - сахар (можно варенье или сахар + варенье в одинаковых количествах), варить 20 мин.;
4. наконец добавить манку в указанных количествах, варить до разваривания крупы (30мин - 1час);
5. остудить до 60oС и добавить пропионовой кислоты для предотвращения развития плесени;
6. разлить по используемым ёмкостям, накрыть марлей и оставить до испарения воды;
7. ёмкости плотно закрыть стерильными ватными пробками.
А получится превосходный корм для мух-дрозофил: рабочей лошадки генетических исследований.
На закуску:
Фенольный метод выделения DNA из мух
1. взвесить мух;
2. в керамической ступке заморозить мух в жидком азоте, растереть в тонкий порошок;
3. долить в ступку жидкий азот, добавить DB из расчета 1.2ml на 100mg, растереть;
4. перенести замороженный порошок в пробирку;
5. 56oС, > 3h;
6. мягко экстрагировать равным объёмом фенола;
7. ЦФ в два этапа:
(1) 1.5krpm, NT, 5',
(2) 4.5krpm, NT, 10';
8. мягко экстрагировать Ф:Х, Х, (ЦФ 4.5krpm, NT, 10');
Осаждение EtOH.
9. добавить:
AcNH4 10M 1/4V,
EtOH (96%) 2V;
10. комочек DNA прополоскать, перенеся типом в 70% EtOH;
11. подсушить (не пересушить!), растворить в TE или H2O (из расчёта ~1µl/муху).
Диализ.
12. поместить DNA в диализный мешок;
13. диализ: ~сутки против нескольких смен TE.
А вы говорите - "подготовьте мышь к опыту...". Да, именно так!
